Basic Real-time PCR (1): PCR คืออะไร
ยังคงคิดถึงบล็อกนี้อยู่และอยากจะอุทิศเวลาบางส่วนในการถ่ายทอดความรู้เรื่องนี้เอาไว้ คิดว่าเอกสารที่ทำเพื่อประกอบ การอบรมเชิงปฏิบัติการ Realtime PCR and its applications เมื่อกลางเดือนพฤศจิกายนปีที่แล้ว ซึ่งตั้งใจเขียนให้อ่านง่าย เข้าใจง่ายแบบที่ตัวเองเคยอยากให้มีสมัยทำงานกับเทคนิคพวกนี้ใหม่ๆนั้น น่าจะเอามาเผยแพร่ไว้ใน GotoKnow ด้วย ก็เลยจะเอามาค่อยๆใส่เก็บไว้ และหากนึกอะไรได้ที่เกี่ยวข้องก็จะได้ใส่เพิ่มเติมไว้ด้วยนะคะ
PCR คืออะไร
Polymerase Chain
Reaction
Polymerase
คือเอนไซม์ที่ทำให้เกิดการต่อสาย DNA หรือ
RNA จากสายที่มีอยู่แล้ว
Chain reaction คือ ปฏิกิริยาลูกโซ่
นั่นคือต่อเนื่องกันไปเรื่อยๆ
PCR ก็คือปฏิกิริยาที่มีการสร้างสาย nucleotide ต่อเนื่องไปเรื่อยๆ ถือได้ว่าเป็นเทคนิค ที่มีผลกระทบอย่างมากต่องานทาง molecular ตั้งแต่ปี 1985 ที่ Kary Mullis คิดค้นขึ้นมา เพราะทำให้เราสามารถเพิ่มจำนวน DNA ได้มหาศาลจากจำนวนเริ่มต้นเพียงเล็กน้อยภายในเวลาไม่นาน ด้วยหลักการง่ายๆ
ส่วนประกอบของ PCR
1.
template
คือต้นฉบับของ DNA
ที่เราต้องการจะเพิ่มจำนวน
2.
primers
คือสาย DNA ที่เป็น single strand
ที่จับคู่ได้กับปลายของ template ทั้งสองด้าน
โดยจะมีด้าน 3’ เป็น hydroxyl group
ที่จะสามารถต่อกับ nucleotides
อื่นได้
3.
polymerase
คือเอนไซม์ที่จะใช้เพื่อการต่อสายของ
DNA
4.
nucleotides
ทั้ง 4 ตัว (A-adenine,
C-cytosine, G- guanine, T-thymine) ที่เอาไว้ต่อกันเป็น
DNA สายใหม่
5.
PCR machine
คือเครื่องมือที่ใช้สำหรับปรับเปลี่ยนอุณหภูมิไปมา
หัวข้ออื่นๆต่อๆไป
- ขั้นตอนพื้นฐานของ PCR
- ธรรมชาติของปฏิกิริยาPCR
- Real-time PCR คืออะไร
- ความแตกต่างระหว่าง Conventional กับ Real-time PCR
- ข้อดีหลักของ Real-timePCR
- ข้อด้อยของ Real-timePCR
- สิ่งที่เกี่ยวข้องในReal-timePCR
- Real-time PCR Chemistries
- ลักษณะการใช้งาน Real-time PCR
- ลักษณะของ quantification ใน real-time PCR
- วิธีการเลือกใช้เทคนิคใน real-time PCR
- Assay Development (การเริ่มพัฒนา assay)
- Assay Validation
- Real-time PCR systems ที่ใช้กันแพร่หลายในปัจจุบัน
- Website ที่มีประโยชน์ต่อการ design assay
- Applications of Real-Time PCR
จะมาทำลิงค์ไว้กับบันทึกนี้เรื่อยๆไปค่ะ ในการเขียนบทความนี้ในรูปแบบนี้เพื่องานอบรมฯ ได้ใช้เวลาพอสมควรจึงไม่อยากให้ถูกเก็บเข้ากรุไปเสียก่อนค่ะ ใครที่เข้ามาอ่านแล้วอยากแลกเปลี่ยนอะไรในหัวข้อข้างบนก็ยินดีนะคะ ปริญญาเอกที่ได้มาก็เพราะทำเรื่องพวกนี้แหละค่ะ ยังอยากให้ได้เป็นประโยชน์กับคนอื่นๆให้คุ้มกับแรงกำลังที่ลงไปในงานพวกนี้และภาษีของพวกเราชาวไทยที่ใช้ในการเรียนจนจบมาค่ะ
ดาวน์โหลดเอกสารทั้งฉบับได้ตรงนี้เลยค่ะ Basic RealTime PCR
ความเห็น (13)
ได้ความรู้มากค่ะ
อยากจะถามเรื่องวิธีการตรวจวิเคราะห์คุณโอ๋ เรื่องหนึ่ง แต่ไม่กล้าถามที่นี่
การตรวจอะไรๆ อาจมีหลบผลลัพท์ ที่ไม่อยากได้ก็ได้ ใช่ไหมคะ
ตามไปให้ถามแล้วนะคะ คุณ sasinanda
ขอบคุนมากคับ
กำลัง หา อยู่เลยว่ามันคืออะไร
มาอ่านค่ะ เดี๋ยวคงมีคำถามไปหลังไมค์ ;P
คุณหมอเล็กคะ มีฉบับเต็มๆอยู่ที่นี่ค่ะ http://gotoknow.org/blog/moleculartechnology/129105
ยินดีตอบคำถามนะคะ ดีใจที่ได้เขียนบล็อกนี้ เพราะได้ตอบคำถามหลังไมค์เยอะมากๆต่อเนื่องกันมาตลอดเลยค่ะ ตั้งแต่เขียนบันทึกชุดนี้ไป ทำให้รู้สึกว่าความรู้ที่มีไม่สูญเปล่า สงสัยอยู่เหมือนกันค่ะว่า ที่เขาสอนๆกันอยู่นั้น เขาทำให้มันยากไปหรือเปล่า มีนักศึกษาสงสัยไม่เข้าใจกันเยอะจังค่ะ
หวัดดีค่ะคุณโอ๋ ชื่นชมบล็อกนี้มากค่ะ ให้ความรู้ molecular technique ดีค่ะ ตอนนี้กำลัง research molecular อยู่ อยากให้คุณโอ๋อธิบายเรื่อง reverse transcriptase PCR ค่ะ เท่าที่อ่านมา คือใช้วิธีเหมือน PCR แต่ต้องมีขั้นตอนเปลี่ยน mRNA ให้เป็น cDNA ก่อน อยากถามว่า RT-PCR เราสามารถวัดผลเป็น quantitiative ได้ไหมคะ ขอคำตอบทาง e-mail ก็ได้ค้ะ กำลังรอคำตอบนะคะ ขอบคุณค่ะ
สวัสดีค่ะ..หนูเรียนเทคนิคการแพทย์ชั้นปีที่ 3 แล้วอ่ะค่ะ เทอมนี้มีเรียนวิชาเทคนิคพื้นฐานทางอณูชีววิทยา ซึ่งวิชานี้เป็นอะไรที่ไม่เข้าหัวเลย..อาจารย์สอนให้ยากรึว่าหนูงงเองก็ไม่รู้นะคะ วันนี้เรียนเรื่อง DNA Synthesis ,RNA Synthesis ,Protein Synthesis หนูอยากให้พี่ช่วยอธิบายเรื่องที่เรียนวันนี้ให้หนูหน่อยนะคะ ขอขอบพระคุณล่วงหน้าอย่างสูงเลยค่ะ
ปล.หนูไม่เข้าใจเรื่องนี้จริงๆ หนักใจมากเลยค่ะ จะอ่านหนังสือเองก็ไม่ได้เพราะไม่เข้าใจ TT^TT
หายไปเสียนานไม่ได้ตอบคุณ doctorda [IP: 58.8.82.246] เลยสงสัยจบ research ที่ว่าไปแล้ว อธิบายง่ายๆสำหรับ reverse transcriptase PCR ก็คืออย่างที่คุณ doctorda เข้าใจแหละค่ะ คือเปลี่ยน mRNA เป็น cDNA ด้วยเอนไซม์ reverse transcriptase แล้วก็ตอบคำถามขั้นต่อไปว่า วัดผลเป็น quantitative ได้เพราะเราสามารถวัดปริมาณ cDNA ที่ได้ทั้งจากการวัดด้วยเครื่องโดยตรง หรือจากวิธีดั้งเดิมของเราที่วัด OD แล้วคิดออกมาเป็นปริมาณได้ ทำให้เราสร้างเป็น standard curve โดยใช้ serial dilution ของ cDNA ที่เรารู้ปริมาณเป็นตัวเทียบกับ unknown ที่เอามา run ใน real-time PCR พร้อมๆกัน (เพื่อควบคุม condition ให้เปรียบเทียบกันได้)
สำหรับหนู ออมสินอย่าเพิ่งท้อใจค่ะ เรื่องนี้พอเข้าใจแล้วไม่ยากเลย เอาเป็นว่าลองเข้าไปหาดูคลิปของทั้ง 3 ขั้นตอนใน Youtube หรือจะใช้วิธีพิมพ์ทั้ง 3 คำนี้ (DNA Synthesis ,RNA Synthesis ,Protein Synthesis) ใส่เข้าไปใน Google นั่งดูนั่งฟังสัก 2-3 ชิ้น แล้วกลับไปอ่านสิ่งที่อาจารย์สอนวันนี้อีกที รับรองหนูน่าจะทำความเข้าใจได้ง่ายขึ้นแน่ๆค่ะ เดี๋ยวนี้การเรียนรู้ด้วยวิทยาการหลายๆรูปแบบทำได้ง่ายขึ้น หาวิธีทำความเข้าใจเรื่องยากๆได้หลายวิธีค่ะ
Real-time PCR Chemistries เป็นต้นไป link ไม่ได้คะ
มีฉบับเต็มๆอยู่ที่นี่ค่ะ http://gotoknow.org/blog/moleculartechnology/129105
ก็เลยไม่ได้ทำเป็นตอนย่อยๆอีกค่ะ โหลดทั้งฉบับไปอ่านทีเดียวเลยสะดวกกว่านะคะ